Состав крови образован плазмой и форменными компонентами, большую часть из которых составляют эритроциты. Зрелые кровяные клетки не содержат ядра и имеют двояковогнутую форму. Главная их функция – транспортировка газов в тканях органов. Уровень эритроцитарных клеток в крови человека зависим от таких факторов, как пол и возраст, но является величиной достаточно постоянной, поэтому колебание их количества дает ценную информацию в процессе диагностирования.
Для вычисления количества кровяных клеток чаще всего используется унифицированный метод подсчета эритроцитов с использованием оборудования, известного, как камера Горяева, либо с помощью электронных счетчиков автоматического типа. Оба способа на данный момент широко используются и в ежедневной лабораторной практике, и при научных изысканиях, так как погрешность результатов, полученных в ходе их применения, минимальна.
Строение камеры Горяева
Оптическое устройство – камера Горяева позволяет вычислить количество кровяных клеток в определенном объёме специальной жидкости. Идея создания устройства принадлежит русскому профессору Горяеву Н. К.
Главный элемент устройства – прозрачное предметное стекло с камерой, образованной углублением в форме прямоугольника, поверхность которой покрыта специальной микроскопической сеткой, и тонкое покровное стекло. Высокая точность результатов подсчета достигается благодаря повышенному объёму сетки в сравнении с аналогичными устройствами других типов.
Сетка устройства имеет площадь 9 мм2, размер одной стороны составляет 3 мм. Поверхность данного элемента образована квадратами общим числом в 225 шт. Из них одна сотня квадратов поделена на прямоугольники, еще столько же – не разграфлено, а 25 штук поделены на 16 более маленьких. Площадь 1 малого квадрата составляет 1/400 мм2, область над ним имеет объём 1/4000 мм3.
Мнение врачей:
Метод подсчета количества эритроцитов в крови с помощью камеры Горяева является широко используемым и достаточно точным способом оценки этого показателя. Врачи отмечают, что данная методика позволяет проводить быстрый и надежный анализ крови, что особенно важно при диагностике различных заболеваний, связанных с кроветворением. Камера Горяева обладает высокой чувствительностью и позволяет проводить исследование с минимальным количеством образца крови, что делает процесс более комфортным для пациента. Благодаря этому методу врачи могут быстро получить необходимую информацию о состоянии крови пациента и принять соответствующие меры по лечению или контролю заболевания.
https://www.youtube.com/embed/QO6u4qJwAaY
Разбавление крови с целью исследования
Определение количества эритроцитов состоит из нескольких последовательных действий. Первым этапом становится разведение определенного объёма крови в реагенте. Делается это в связи с огромным числом форменных элементов.
В качестве реагента чаще всего выступает раствор хлорида натрия концентрацией 0,9%. При необходимости альтернативой служит 5% раствор натрия цитрата. Процедуру разбавления крови выполняют в пробирке или в специальном смесителе, называемом меланжером.
Внимание! Использование растворов с более высокой или низкой концентрацией исключено, так как повлечет за собой разрушение кровяных клеток.
Разбавление крови в меланжере
Меланжером называется изготовленный из стекла градуированный капилляр длинной 10 см с расширением на конце, внутри которого расположен шарик. Последний выполняет важную функцию – равномерное смешивание раствора и крови. Цвет шарика меланжерного капилляра будет красным, если он предназначен для эритроцитов, и белым – для работы с лейкоцитами.
Методика подсчета эритроцитов позволяет проводить процедуру исследования и со стабилизированной кровью, и с нестабилизированным материалом сразу после его забора у пациента.
Кровь набирают меланжерным капилляром до деления 0,5, после чего кончик смесителя очищают от крови с помощью марли либо ватки и следующим действием набирают разбавляющий раствор до деления 101. Перекрыв пальцами отверстия капилляра, полученный образец тщательно смешивают около 3 минут. В счётную камеру помещают четвёртую каплю, предварительно удалив первые три на марлю. Таким образом получают разбавление крови в 200 раз.
Опыт других людей
Метод подсчета количества эритроцитов в крови с помощью камеры Горяева вызывает много положительных отзывов среди специалистов и пациентов. Этот метод считается одним из самых точных и надежных способов определения уровня эритроцитов в крови. Благодаря использованию камеры Горяева, возможно провести быстрый и точный анализ крови, что позволяет диагностировать различные заболевания, связанные с кроветворением. Этот метод широко применяется в клинической практике и получил признание за свою эффективность и точность результатов.
Разбавление крови в пробирке
При пробирочном методе разбавления крови исследуемый материал разводят в 200 раз следующим образом: 4 мл раствора хлорида натрия помещают в пробирку, после чего добавляют 0,02 мл крови.
Для этого забор материала производят пипеткой, кончик которой протирают ваткой или другой тканью. Образец крови помещают на дно пробирки, пипетку промывают ближе к поверхности раствором хлорида натрия. Готовый образец перемешивают и оставляют до дальнейшего этапа исследования, но менее чем на 3 часа.
Подсчет количества эритроцитов
Камера Горяева обязательно располагается горизонтально. Всю площадь сетки аккуратно заполняют разведенным образцом. Важно проследить, чтобы не образовались пузырьки воздуха, ведь их наличие значительно исказит результат. В таком положении камера остается в течение одной минуты с целью оседания кровяных клеток.
Унифицированный метод подсчета эритроцитов проходит при среднем увеличении посредством микроскопического осмотра. Подсчет числа эритроцитов в камере Горяева ведут в 5 больших квадратах, поделенных на 16 малых. Начало отсчета рекомендовано производить с большого квадрата, находящегося вверху слева, и далее по диагонали.
Важно! Чтобы количество клеток, находящихся на линиях малых квадратов, не было подсчитано дважды, рекомендуют пользоваться правилом Егорова: в каждом квадрате вести подсчет по двум определенным линиям (верхней и левой).
Начинают высчитывание клеток в малых квадратах в верхнем ряду слева направо от 1-го до 4-го в этом ряду. Переходя к следующему ряду, подсчет ведут в обратном порядке – справа налево. Переход к подсчету клеток в следующем большом квадрате производят после вычисления эритроцитов в этих 16 малых квадратах.
Непосредственно расчет числа эритроцитов ведут по формуле, отображенной на рисунке №2.
Обозначения в данной формуле расшифровываются следующим образом:
- X – искомое число красных кровяных клеток в 1 мкл крови;
- A обозначает количество сосчитанных клеток;
- 200 – разбавление крови;
- 80 – это количество малых посчитанных квадратов;
- 1/4000 – объем маленького квадрата.
Внимание! Для достоверности результата расчет кровяных клеток при некоторых видах анемии необходимо проводить непосредственно после забора материала.
Возможные причины искажения результата
Как и любой другой лабораторный анализ, подсчет эритроцитов требует тщательной подготовки и аккуратности в исполнении. Искажение результатов анализа может возникнуть вследствие целого ряда причин. Оборудование хранят в сухом месте. Любая лабораторная работа, связанная с кровью, выполняется в резиновых перчатках.
Для начала следует убедиться в правильности подготовки и использования камеры. Перед работой и по ее окончании устройство необходимо тщательно промывать дистиллированной водой и насухо протирать мягкой тканью. Покровное стекло должно быть подготовлено заблаговременно таким же образом.
Возможные причины, влияющие на достоверность результата:
- Некачественные реактивы, способные вызывать гемолиз.
- Формирование сгустка крови в материале.
- Неаккуратность в процессе забора крови в капилляр.
- Плохо обработанные пробирки и пипетки.
- Недобросовестная техника исполнения при работе с камерой и подсчете эритроцитов.
- Высчитывание клеток сразу же после заполнения камеры (необходимо выждать 1 минуту, чтобы они успели осесть на поверхность).
В последнее время все большую популярность получает метод подсчета эритроцитов с использованием электронных счетчиков автоматического типа. Такая тенденция вполне обоснованна, так как автоматизированный процесс исследования значительно точнее и менее трудоёмок.
Принцип действия данного оборудования основан на разном показателе электропроводности клеток крови и раствора, в котором они помещены. Специальное электромагнитное устройство регистрирует изменение уровня сопротивления электрической цепи, когда эритроциты движутся через отверстие капилляра. Уже через несколько секунд на цифровом табло высвечивается результат с высчитанным числом клеток.
Повышенный показатель красных кровяных клеток в анализе называется полицитемией. Данное состояние возникает вследствие патологий, характеризующихся потерей жидкости в организме, например при диарейном синдроме. Часто такое явление наблюдается на первых этапах инфекционных заболеваний, при отравлении токсичными веществами и прочем. Снижение же концентрации эритроцитов в крови известно как олигоцитемия. И зачастую такая патология проявляется во время различного вида анемии.
Частые вопросы
Как считать эритроциты в камере Горяева?
Эритроциты в камере подсчитываются в больших квадратах, которые по размерам равны 80-ти малым. Возможно неравномерное распределение крови. Чтобы этого избежать выбираются квадраты по диагонали. Клетки, которые расположены по краям предназначены для подсчета эритроцитов.
Какие методы используют для определения количества эритроцитов?
В настоящее время для определения количества эритроцитов (RBC, red blood cell) используют два метода: подсчет эритроцитов в счетной камере Горяева и с помощью автоматических счетчиков и анализаторов.
Как считать на камере Горяева?
Подсчет форменных элементов крови N=m4000s/q, где N – искомое количество ФЭ в 1 мкл крови, m – число ФЭ в определенном количестве малых квадратов, q – количество малых квадратов сетки камеры Горяева, в которых подсчитывались ФЭ, s – степень разведения крови.
Каким раствором разбавляют кровь для подсчета эритроцитов в камере Горяева?
- 5% раствором уксусной кислоты + метиленовый синий.
Полезные советы
СОВЕТ №1
При подсчете количества эритроцитов в крови с помощью камеры Горяева, убедитесь, что камера и все используемые инструменты абсолютно чистые, чтобы избежать ошибок в результате.
СОВЕТ №2
Тщательно обучитесь методике подсчета с использованием камеры Горяева перед началом работы, чтобы правильно провести процедуру и получить точные данные.
СОВЕТ №3
При подсчете количества эритроцитов, не торопитесь и проводите процедуру в спокойной обстановке, чтобы избежать ошибок и получить надежные результаты.